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Les produits fabriqués et les Trois R
La production d'anticorps
Les anticorps sont produits par le système immunitaire d'un animal comme moyen de défense contre un immunogène spécifique. Étant donné que de la douleur et de la détresse peuvent être associées à la production d'anticorps, et compte tenu du niveau supérieur de compétence requis ainsi que du coût réel de production interne pour une institution, il faut envisager l'achat d'anticorps offerts sur le marché par des fabricants qui respectent les lignes directrices du CCPA.
Les anticorps polyclonaux
Une réaction humorale avec activation polyclonale résulte de la production d'anticorps sécrétés par plusieurs populations clonales ayant diverses spécificités (pour des épitopes différents, y compris ceux situés sur une même molécule), affinités et classes. Cette réaction est donc une forme de défense efficace contre les pathogènes. Les antisérums polyclonaux sont difficiles à reproduire compte tenu de la diversité des anticorps sécrétés lors de la réaction polyclonale. La quantité d'anticorps produite et leur qualité varient d'un animal à l'autre et même chez le même animal à des moments différents. Par conséquent, la disponibilité des anticorps polyclonaux (AcP) est limitée et leurs caractéristiques peuvent changer pendant la période de production.
Les antisérums sont généralement produits par injection à un animal de l'immunogène (antigène) cible qui est souvent combiné à un adjuvant pour accroître la réaction immunitaire. Par la suite, la réaction immunitaire peut être amplifiée par des injections de rappel d'antigène, avec ou sans adjuvant. Des échantillons de sang de l'animal sont prélevés pour évaluer le niveau de production d'anticorps. Lorsque le titre est suffisamment élevé, l'antisérum est préparé en effectuant une prise de sang suivie de l'isolement du sérum puis, si nécessaire, de la purification des anticorps à partir du sérum. À ce sujet, les préoccupations liées au bien-être animal se rapportent aux éléments suivants :
- le choix de l'adjuvant;
- l'injection de l'antigène et de l'adjuvant;
- le prélèvement sanguin.
L'adjuvant sélectionné doit posséder le plus faible pouvoir réactogène permettant de stimuler une réaction immunitaire. Les procédures utilisées pour l'injection de l'antigène et de l'anticorps devraient garantir l'utilisation d'un volume d'injection le plus petit possible et que les réactions aux sites d'injection entraînent le moins de détresse chez l'animal. Pour de plus amples renseignements sur les meilleures pratiques pour le prélèvement sanguin, voir l'administration de composés et le prélèvement sanguin.
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Les anticorps monoclonaux
Les anticorps monoclonaux (AcM) sont issus d'un même clone et sont donc spécifiques à un même épitope pour lequel ils ont une affinité déterminée. Ainsi, si l'on obtient l'AcM souhaité, celui-ci pourra être extrêmement spécifique pour l'immunogène visé et, dans des conditions adéquates, il est possible de créer un produit de qualité constante en quantité presque illimitée. Les anticorps monoclonaux peuvent être produits in vitro et in vivo.
La production d'AcM chez les souris par la méthode des ascites soulève plusieurs préoccupations liées au bien-être animal. Il a été signalé que la production de l'ascite et la croissance de tumeurs causent de la souffrance chez l'humain, tandis que chez l'animal, cela cause une douleur ou une détresse intense qui peut résulter de :
- l'injection intrapéritonéale de l'amorce (p. ex., le pristane ou l'adjuvant incomplet de Freund);
- l'effet de l'amorce après l’administration (c'est-à-dire une irritation chimique qui provoque une péritonite et la sécrétion de liquide séreux);
- l'inoculation par injection intrapéritonéale des hybridomes;
- la croissance des cellules tumorales dans la cavité abdominale (effet principal) sous forme de plaques péritonéales qui s'infiltrent dans la paroi abdominale ou les organes abdominaux;
- les changements pathophysiologiques et pathologiques complexes; et
- l'immobilisation et l'administration d'anesthésiques avant le prélèvement du liquide ascitique.
En conséquence, un certain nombre de méthodes in vitro ont été conçues afin de remplacer la méthode des ascites pour la production d'AcM chez les rongeurs. Il est généralement admis que les techniques in vitro de production d'AcM ont progressé et qu'elles peuvent maintenant être employées pour produire plus de 90 % des AcM. De plus, certains pays ont interdit la production courante d'AcM in vivo.
Les lignes directrices du CCPA spécifient que tous les efforts doivent être faits pour se procurer des substances déjà disponibles ou pour produire des AcM par des méthodes in vitro. Par conséquent, le chercheur doit justifier auprès du comité de protection des animaux tout projet de production d'anticorps monoclonaux par la méthode des ascites.
Pour de plus amples renseignements sur les anticorps, les ressources suivantes peuvent s'avérer utiles :
Ressources conçues par le CCPA
Ressources en ligne
- Alternatives to Animal Testing Web Site (Altweb). Special Section : Monoclonal Antibodies, 2007. [en anglais seulement]
- Ce document contient des renseignements sur des questions liées à la production d'AcM, des descriptions de méthodes in vitro comme solutions de rechange à la méthode des ascites et une liste de producteurs d'AcM.
- Antibody Resource Page.
- Un guide conçu pour faciliter la recherche d'entreprises qui vendent des anticorps par catalogue ainsi que des anticorps monoclonaux et polyclonaux sur mesure; ce site contient également des renseignements sur des bases de données, des logiciels et des sites Web éducatifs liés aux anticorps.
- Humane Society of the United States (HSUS). Pain and Distress Associated with Polyclonal Antibody Production : Discussion and Recommendations, 2002. [en anglais seulement]
- Institute for Laboratory Animal Research (ILAR). «
Immunization Procedures and Adjuvant Products »
, numéro thématique, dans ILAR , vol. 46, n° 3, 2005. [en anglais seulement]
- LEENAARS, P.P.A.M., HENDRIKSEN, C.F.M., de LEEUW, W.A., CARAT, F., DELAHAU, P., FISCHER, R., HALDER, M., HANLY, W.C., HARTINGER, J., HAU, J., LINDBLAD, E.B., NICKLAS, W., OUTSCHOORN, I.M. et STEWART-TULL, D.E.S. «
The Production of Polyclonal Antibodies in Laboratory Animals. ECVAM Workshop Report 35 »
, dans ATLA, vol. 27, n° 1, 1999, p. 79-102. [en anglais seulement]
- Ce rapport d'ECVAM est accessible en ligne à http ://ecvam.jrc.ec.europa.eu/
, en sélectionnant «
Workshop Reports »
sous l'onglet «
Publications »
, puis en utilisant la barre de défilement vers le bas afin de le repérer parmi la liste.
- MARX, U., EMBLETON, M.J., FISCHER, R., GRUBER, F.P., HANSSON, U., HEUER, J., de LEEUW, W.A., LOGTENBERG, T., MERZ, W., PORTETELLE, D., ROMETTE, J-L. et STRAUGHAN, D.W. «
Monoclonal Antibody Production. ECVAM Workshop Report 23 »
, dans ATLA, vol. 25, n° 2, 1997, p. 121-137. [en anglais seulement]
- Ce rapport d'ECVAM est accessible en ligne à http ://ecvam.jrc.ec.europa.eu/
, en sélectionnant «
Workshop Reports »
sous l'onglet «
Publications »
, puis en utilisant la barre de défilement vers le bas afin de le repérer parmi la liste.
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